NAD-蘋果酸酶（NAD-ME ）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0112 | 售價（元） | 816 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0112 |
NAD-蘋果酸酶（NAD-ME ）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多，已經成為抗氧化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
測定原理：
NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。
組成：
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產品名稱 |
SH0112-100T/96S |
Storage |
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提取液： |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml石英比色皿和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入15ml試劑一和1ml蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、 測定前將檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、55μl試劑二和160μl工作液，混勻后立即記錄340nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：如果ΔA＜0.005，可將反應時間延長到2分鐘或5分鐘。
NAD-ME活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T= 3617×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T = 3617×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =7.234×ΔA
V反總：反應體系總體積，2.25×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T= 7234×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T = 7234×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T =14.468×ΔA
V反總：反應體系總體積，2.25×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量；500：細菌或細胞總數，500萬。