測定意義：

木質素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，屬于木質素降解酶系，在木質素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應用潛力。

測定原理：

木質素過氧化物酶催化天青脫甲基，在651nm處測定吸光值減少。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入80ml蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存1個月；

需自備儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機、分光光度計、1 ml玻璃比色皿、可調式移液器、冰。

酶液提取：

1、組織：按照質量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

2、細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

3、培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至651nm，蒸餾水調零。

2、臨用前按每個樣本試劑一：試劑二：試劑三= 400:200:200（μl）的比例配制工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、在1ml玻璃比色皿中依次加入如下試劑

充分混勻，立即測定651nm處10s和130s吸光值，記為A1和A2，△A=A1- A2

酶活計算公式：

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每mg組織蛋白在每ml反應體系中每分鐘A651變化0.02為一個酶活力單位。

LiP活性（U/mg prot）= ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.02÷T =125×ΔA÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義：每g組織在每ml反應體系中每分鐘A651變化0.02為一個酶活力單位。

LiP活性（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.02÷T =125×ΔA÷W

3．按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每1萬個細菌或細胞在每ml反應體系中每分鐘A651變化0.02為一個酶活力單位。

LiP活性（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.02÷T =0.25×ΔA

4．按照液體體積計算

酶活性定義：每ml血清（漿）在每ml反應體系中每分鐘A651變化0.02為一個酶活力單位。

LiP活性（U/ml）=ΔA×V反總÷V樣÷0.02÷T =125×ΔA

V反總：反應總體積，1ml；V樣：反應中樣本體積，0.2ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，2min