簡(jiǎn)單免洗檢測(cè)，可同時(shí)監(jiān)測(cè)3種耐藥性相關(guān)的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白耐藥性是一種因ATP結(jié)合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)所產(chǎn)生的現(xiàn)象。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過(guò)度表達(dá)了加速有毒物質(zhì)從細(xì)胞中的去除，例如化療劑從腫瘤細(xì)胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。Enzo的EFLUXX-ID^? 多藥耐藥性檢測(cè)試劑盒可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)三種臨床相關(guān)的 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能檢測(cè)：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。

◆特點(diǎn)

●　簡(jiǎn)單免洗的操作步驟，結(jié)果可在1小時(shí)內(nèi)獲得

●　可檢測(cè)與3種ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP）活性相關(guān)的耐藥性

●　通過(guò)單一專用染料可定量檢測(cè)活細(xì)胞中的多藥耐藥性（MDR）活性，并以MDR 活性因子（MAF）表征

●　試劑盒內(nèi)含有三種已知的MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP蛋白特異性抑制劑

●　可檢測(cè)Calcein AM染料無(wú)法檢測(cè)的BCRP蛋白活性

●　有綠色、金色兩種熒光染料可供選擇

●　兩種染料均可與表達(dá)GFP的細(xì)胞系或其他CELLESTIAL^? 染料同時(shí)使用

◆作用機(jī)制

 EFLUXX-ID^?使用了一種疏水性非熒光化合物，這種化合物容易穿透細(xì)胞膜，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)酯酶水解成親水性熒光染料。除非EFLUXX-ID^? 染料被泵出至細(xì)胞外，否則酯酶裂解的染料會(huì)一直存在于細(xì)胞內(nèi)。因此，表現(xiàn)出耐藥性的細(xì)胞將染料主動(dòng)運(yùn)輸泵出胞外，會(huì)出現(xiàn)熒光減弱的現(xiàn)象。EFLUXX-ID^? 檢測(cè)是目前少有可同時(shí)監(jiān)測(cè)三種主要的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白并能夠分析單泵活性的試劑盒。

表1：EFLUXX-ID^? 多藥耐藥性染料與其他熒光染料的兼容性

圖1：對(duì)三種主要ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性進(jìn)行檢測(cè)。使用EFLUXX -ID Green（上）、Gold（中）或Calcein AM（下）染料，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估CHO K1細(xì)胞中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性。與未處理的細(xì)胞相比，用ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白特異性抑制劑（圖中陰影部分）處理可誘導(dǎo)染料保留在細(xì)胞內(nèi)（圖中實(shí)線部分）。平均熒光強(qiáng)度（MFI）的差異表明了對(duì)應(yīng)蛋白的活性，在圖中通過(guò)多藥耐藥性活性因子值（MAF）進(jìn)行表征。更高的MAF值表明EFLUXX-ID染料對(duì)抑制劑有著良好的特異性。而Calcein AM染料的低MAF值表明其（常用的MDR檢測(cè)探針）無(wú)法檢測(cè)BCRP活性。

圖2：使用EFLUXX-ID^? Green和EFLUXX-ID^? Gold染料在CHO K1細(xì)胞中評(píng)估已知抑制劑對(duì)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性的結(jié)果分析。將細(xì)胞與試劑盒中含有的MDR普通抑制劑（左一）、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白特異性抑制劑在37°C下孵育5 min。隨后在37°C下用指定的染料染色細(xì)胞30 min，并立即利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。所用抑制劑：5 μM環(huán)胞霉素 A（MDR普通抑制劑）、20 μM維拉帕米（P-gp特異性抑制劑）、0.05 mM MK-571（MRP特異性抑制劑）、0.05 mM新生霉素（BCRP特異性抑制劑）。

圖3：EFLUXX-ID? Green 490/514 nm ex/em和Gold 530/570 nm ex/em 試劑的光譜特性可與其他常見的熒光染料進(jìn)行多重檢測(cè)。

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